實驗室污染之PCR污染如何處理
來源：網(wǎng)絡(luò) 發(fā)布時間：2020-03-24 11:15:30
避免污染是實驗室里的頭等大事。生物實驗大多數(shù)是微觀的，基于細胞，分子，蛋白水平。而這些微觀樣本對外界環(huán)境的影響敏感，環(huán)境中的“雜質(zhì)”亂入，如樣本污染、試劑儀器交叉污染、產(chǎn)物氣溶膠污染等，會對實驗結(jié)果帶來負(fù)面影響。
分子生物學(xué)檢測方法，如PCR，因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。不過正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性，所以對環(huán)境污染的控制也極為嚴(yán)格。
其中，氣溶膠污染是非常重要卻容易被忽視的。在操作時，比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，開蓋、吸樣、污染進樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。
定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域、試劑分裝、操作謹(jǐn)慎、重復(fù)實驗、多角度驗證結(jié)果，這些都是實驗室控制污染的方法。
但是污染源無處不在，特異性的，非特異性的，同源的，非同源的，廣泛分布在樣本容器、實驗室臺面、試劑溶液中、儀器表面、內(nèi)管等等，所以對污染物的控制不僅僅是普通清理就能避免的，關(guān)鍵是需要從源頭控制。
實驗室大拿們都為了清除這些污染源研究出好多種方法，整理跟大家共享。
實驗室內(nèi)各工作區(qū)的實驗用品，包括移液器等應(yīng)專用。如有可能，應(yīng)在裝有紫外燈的層流式工作臺（如生物安全柜、超凈工作臺）內(nèi)，吸加PCR試劑，工作臺內(nèi)應(yīng)放置PCR專業(yè)用的微量離心機、一次性手套、各量程的移液器和其他必須物品。
吸加PCR試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按要求進行，吸樣要慢，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。
實驗的過程中應(yīng)勤換手套，在進出不同區(qū)域或進行模板操作后，都應(yīng)及時更換手套。
裝有PCR試劑的微量離心管在打開之前應(yīng)先做瞬時離心（約10s），將管壁及管蓋上的液體甩至管底部，從而減少污染手套或加樣器的機會。開管動作要輕，以防管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠，造成污染。
在同時進行多個PCR反應(yīng)時，應(yīng)制備主反應(yīng)混合液，再分裝至PCR反應(yīng)管，zui后添加樣品核酸模板，以減少單個添加操作繁瑣造成的污染。
實驗室自己配置的試劑，如去離子水、緩沖液等，在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或過濾除菌。
分裝PCR試劑：所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝，以減少重復(fù)取樣次數(shù)，并置于-20℃保存，適當(dāng)時，最好做到專人專用。另外，PCR試劑、PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同一冰盒或冰箱。
所有吸頭、反應(yīng)管等應(yīng)一次性使用，使用之前，都應(yīng)經(jīng)過高壓處理。若條件允許，最好使用帶濾器的槍頭。各工作區(qū)內(nèi)的移液器要有標(biāo)識，應(yīng)固定使用用途，不能交叉使用。
實驗設(shè)計方面應(yīng)遵循實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定，實驗中至少應(yīng)：
1. 設(shè)置目標(biāo)DNA陽性對照反應(yīng)。對靶序列所作的適當(dāng)?shù)南♂尮ぷ鲬?yīng)于實驗前在實驗室內(nèi)別的位置進行，這樣可防止將靶DNA的濃溶液帶到實驗室中專門進行PCR的位置。
2. 設(shè)置PCR試劑陰性對照和目標(biāo)DNA陰性對照反應(yīng)。
實驗室建設(shè)初期的設(shè)計建設(shè)
實驗室的合理設(shè)計與建設(shè)是順利進行PCR實驗的基礎(chǔ)和保障，不合理的規(guī)劃設(shè)計給后期實驗的進行帶來很多麻煩，從源頭杜絕實驗的麻煩，需要進行專業(yè)的學(xué)習(xí)。
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